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Excreción del virus de influenza aviar H5N2 en patos Pekin
28 May 2015Un virus de influenza aviar de alta patogenicidad fue identificado a mediados de los 90´s en granjas de aves domésticas mexicanas provenientes de un virus de influenza aviar de baja patogenicidad. En este estudio se determinó la excreción viral por técnica de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real en patos Pekin.
Abreviación de conferencia de José Manuel Carranza Flores, Gary García Espinosa y Luis Padilla Noriega, Universidad Nacional Autónoma de México y Elizabeth Loza Rubio, Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias, México, presentada durante la XL Convención Anual ANECA, Riviera Maya, México en mayo de 2015.
Muestras de cloaca y orofarige fueron tomadas a lo largo de tres semanas y analizadas por técnica de transcriptasa reversa-reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RRT-PCR). La excreción del virus fue detectado a lo largo de las tres semanas en las aves inoculadas con diferentes patrones de eliminación.
Estos resultados aportan datos epidemiológicos para entender los procesos de propagación del VIABP H5N2 residente en México y la importancia de mantener el monitoreo de esta enfermedad en aves domésticas.
Los virus de influenza con subtipos H5 y H7, pueden convertirse a altamente patógenos después de la introducción a las aves domésticas, causando un brote de influenza aviar de alta patogenicidad (IAAP) (Okamatsu, et al., 2007).
El virus de Influenza aviar de baja patogenicidad (IABP) ha sido aislado de al menos 195 especies de aves silvestres de 26 familias diferentes. Las aves acuáticas silvestres del orden Anseriformes (patos, gansos y cisnes) y caradriformes (gaviotas, golondrinas de mar y aves zancudas), se consideran el reservorio natural del virus de influenza tipo A, los cuales contribuyen en la propagación y ecología del virus.
La infección en anseriformes es normalmente asintomática, caracterizada por una replicación preferencial en al tracto intestinal con la subsecuente eliminación del virus a altas concentraciones a través de las heces. (Sturm, K. et al., 2005). Este reservorio funciona como fuente primaria para la introducción de virus de influenza a las aves domésticas.
En México está presente el subtipo H5N2 de baja patogenicidad en pollos, gallinas y gallos desde hace más de 15 años, debido a ello el siguiente estudio pretende aportar información de la excreción de una cepa mexica del VIABP (A/chicken/México/2007) inoculado en patos Pekín, con el objetivo de entender el papel biológico de huésped así como determinar su capacidad de excreción para su transmisión a las especies domésticas.
Efectos en patos y ponedoras
Ocho patos Pekín de tres semanas de edad y cuatro pollos Leghorn (ponedoras) de tres semanas de edad fueron inoculados con 107 DIEP50 del VIABP A/chicken/México/2007. Cuatro aves de cada especie fueron inoculadas con 1 mL de fluido alantoideo SPF como testigos. El inoculo fue distribuido a través de orofarige (0.6 mL), narinas (0.1 mL/narina), ojos (0.1 mL/ojo).
Los 4 pollos Leghorn inoculados de 3 semanas de edad con la cepa H5N2 de baja patogenicidad aislada en el 2007, manifestaron un cuadro clínico correspondiente a una infección del aparato respiratorio superior junto con depresión, estornudo, secreción transparente de narinas, disminución del consumo de alimento, plumas erizado y mucosa conjuntival hiperémica. Estos signos clínicos se presentaron a partir de las 48 horas postinoculación y se mantuvieron presentes hasta la primera semana posterior a la inoculación.
Los patos de tres semanas de edad, presentaron una hiperemia bilateral o unilateral con un aparente aumento de la irrigación de la conjuntiva palpebral a las 72 horas postinfección.
Los grupos de aves testigos negativos de patos y pollos no presentaron ningún signo sugestivo de una infección por el virus.
Así mismo, en ningún grupo, se presentó muerte por causa del virus o por infecciones de bacterias oportunistas.
Los resultados de la cinética de excreción en cloaca del virus de influenza aviar H5N2 de baja patogenicidad en patos Pekín por técnica de RRT-PCR mostró una importante eliminación de partículas virales durante las primeras 12, 24, 48 y 72 horas (28.21, 26.52, 21.83 y 4.36 ng/μl), posteriormente disminuyó considerablemente la cantidad de nanogramos excretados; por el contrario, en pollos, la vía cloacal tuvo una eliminación muy escasa pero sostenida en las primeras horas, pero despuntó hacia la segunda y tercer semana postinoculación con valores de 2.55 y 2.31 ng/μl respectivamente
La cinética de la vía laríngea de patos mantuvo una excreción baja pero ascendente con valor inicial de 5.25x10-2 ng/μl, valores intermedios de 1.02x10-2 ng/μl y finalmente ascendió a 5.80x10-2 ng/μl. Por el contrario, los pollos manifestaron una mayor excreción en nanogramos y además presentaron dos picos de eliminación importantes, uno a las 48 horas con 2.68 ng/μl y otro entre la segunda y tercer semana postinoculación con 2.22 y 2.27 ng/μl.
La evaluación de los anticuerpos específicos contra el virus de influenza H5N2 realizado por técnica de inhibición de la hemaglutinación mostraron un incremento exponencial semana tras semana después de la inoculación, iniciando en la primer semana con un título de 1/16 a 1/64, la segunda semana los títulos se ubicaron en 1/32 a 1/128 y finalmente en la tercer semana fueron de 1/64 a 1/128.
Este comportamiento no se observó en los patos donde se presentó un incremento de anticuerpos en la primer semana con título máximo de 1/32 y posteriormente declinó durante la segunda y tercer semana.
Patos como reservorio de H5N2
Los datos de este estudio indican que el virus de influenza aviar H5N2 de baja patogenicidad utilizado en este estudio bajo las condiciones controladas especificadas, fue capaz de detectarse a través de las tres semanas de monitoreo por técnica de RRT-PCR a partir de muestras de hisopos de faringe y cloaca de patos y pollos después de la inoculación a 107 DIEP50 por la vía oral, ocular y narinas.
Así mismo, manifiesta una enfermedad clínica en los pollos por la evidente presencia de signos clínicos, contrario a los patos que resultaron ser infectados sin mostrar algún signo clínico tal y como se ha descrito en otras publicaciones (Mundt, et al., 2009 y Pillai et al., 2008).
Los resultados sugieren que el virus tiene tropismo respiratorio, sin embargo, puede haber diferencias en la replicación del virus dentro del subtipo H5N2 de baja patogenicidad.
Es importante notar que la carga viral encontrada en la RRT-PCR no coincide con la detección en embrión de pollo, principalmente en cloaca donde la carga viral más alta sucedió en cloaca de patos pero no resulto ser infectiva en embrión de pollo.
Los resultados anteriores muestran que el VIABP mexicano asilado en el 2007 es capaz de infectar y mantenerse por al menos 3 semanas en el pato Pekín, siendo la vía laríngea la principal ruta de excreción de virus infeccioso demostrado en embrión. Esta información sustenta el papel de los patos como reservorio del virus, así como su importancia en la propagación natural de la enfermedad para este virus aislado en México
Bibliografía
Mundt E, Gay L, Jones L. Replication and pathogenesis associated with H5N1, H5N2, and H5N3 low pathogenic avian influenza virus infection in chickens and ducks. Arch. Virol 2009, 154:1241-1248.
Okamatsu M, Saito T, Yamamoto Y, Mase M, Tsuduku S, Nakamura K, Tsukamoto K, Yamaguchi S. Low pathogenicity H5N2 avian influenza outbreak in Japan Turing the 2005-2006. Veterinary Microbiology, 2007; 124:35-46.
Pillai S., Suarez DL, Pantin-Jackwood M, Lee CW. Pathogenicity and transmission of H5N2 parrot avian influenza of Mexican lineage in different poultry species. Vet Microbiol 2008, 129:48-57.
Sturm-Ramirez, K. Are ducks contributing to the endemicity of highly pathogenic H5N1 influenza virus in Asia?.Journal Virology 2005; 79: 11269-11279.
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